Det stoppar import av ryskt guld och fryser storbanken Sberbanks tillgångar.
Dessutom förs ytterligare personer och organisationer upp på listan över vilka som ska vägras visum till EU och få eventuella tillgångar frysta.
Åtgärderna ska underlätta och effektivisera upprätthållande av tidigare sanktioner sade EU-kommissionens ordförande Ursula von der Leyen när hon presenterade paketet i förra veckan.
– Moskva måste fortsätta att betala ett högt pris för sin aggression, sade hon.
Samtidigt får ryska banker tillgång till tidigare låsta tillgångar som kopplas till handel med livsmedel och gödningsmedel, för att bemöta Moskvas anklagelser om att sanktionerna leder till matkris.
Syftet är att se till att sanktionerna inte hotar livsmedels- och energisäkerheten runt om i världen, heter det i uttalandet från den tjeckiska regeringen som innehar ordförandeskapet i EU.