Bolaget riktade in sig på de fuskare som använder tredjepartsprogramvara för att kunna läsa intern information i "Dota"-klienten, som kan ge fördelar i matcher gentemot andra spelare.
I en uppdatering av spelet gillrades en fälla, en så kallad honeypot.
"Uppdateringen satte upp en fälla med en datasektion i spelklienten som aldrig blir läst under vanligt spelande men som kan läsas om man utnyttjar dessa svagheter. Alla de konton som i dag blev avstängda avläste detta 'hemliga' område i klienten, vilket gör oss väldigt säkra på att varje blockering var välförtjänt", skriver Valve.
Normalt sett pågår kampen mot fuskare i hemlighet, men den här gången väljer bolaget att berätta om tillslaget för att varna fuskare.
"Om du kör någon applikation som läser data från 'Dota'-klienten medan du spelar spel, kan ditt konto permanent blockeras från att spela 'Dota'."
Flerspelarspelet "Dota 2" blandar realtidsstrategi med action, och spelas i matcher fem mot fem. Spelet är gratis och är populärt som e-sport, där den penningstinna årliga turneringen The International av många ses som den främsta inom e-sporten.