Olyckan inträffade vid halv åtta på lördagsmorgonen på länsväg 263 i närheten av Skokloster i Uppsala län.
Förarna av de båda fordonen, en kvinna i 45-årsåldern och en man i 20-årsåldern, dog. I hästtransporten färdades även en kvinna i 20-årsåldern som fördes till sjukhus med ambulanshelikopter. Enligt polisen är hennes skadeläge i nuläget oklart.
Hästen som transporterades vid olyckstillfället har undersökts av veterinär och uppges ha klarat sig utan allvarligare skador.
Händelsen utreds av polisen som grovt vållande till annans död.