"Jag anser att det är dags att genomföra de nödvändiga reformerna och att aktivera PLO på ett sätt som återställer dess position och dess roll", säger hon i ett uttalande.
Den 74-åriga Ashrawi lämnar nu uppdraget som ledamot av den 15 personer starka exekutiva kommittén, PLO.s mäktigaste organ, som leds av president Mahmud Abbas.
Hon har som PLO-talesperson varit djupt kritisk mot den plan USA:s president Donald Trump lagt fram för fred mellan israelerna och palestinierna. Hon har också förkastat Israels planer på annektering av delar av den ockuperade Västbanken.
Källor säger att hon motsatte sig beslutet av den 85-årige Abbas i november om att återuppta Palestinska myndighetens koordination med Israel.
Nu säger Ashrawi att det behövs fler kvinnor, ungdomar och högutbildade i det palestinska politiska systemet.
I ett kortfattat uttalande säger Abbas att han accepterat Ashrawis avskedsansökan.