Händelseutvecklingen sker efter att serber på sin sida om gränsen sent på tisdagen använt lastbilar och traktorer för att blockera trafiken mot övergången vid byn Merdare.
Kosovos polis säger i ett uttalande att blockaden är oacceptabel då den "hindrar den fria rörligheten" av människor och varor.
EU och USA manar Kosovo och Serbien till lugn i ett gemensamt uttalande.
"Vi uppmanar alla till maximal återhållsamhet, att vidta omedelbara åtgärder för att utan förbehåll trappa ned situationen och att avstå från provokationer, hot och skrämsel", skriver EU och USA efter beskedet att gränsövergången stängs.
Det har alltid varit spänt mellan Kosovo och Serbien, som aldrig erkänt den nya staten som utropade sin självständighet 2008. Situationen har förvärrats de senaste veckorna.
Etniska serber i norra Kosovo har under december satt upp vägspärrar på landsvägar nära gränsen mot Serbien. Kosovo har begärt att den Natoledda internationella fredsstyrkan Kfor ska riva barrikaderna. Skottlossningar riktade mot Kfor och Kosovos polis har också förekommit.
Serbiens president Aleksandar Vucic meddelade på tisdagen att landets militära styrka vid gränsen utökas till 5 000 soldater och sätts i högsta beredskap.