Den nya lagen, som godkändes genom en omröstning i landets parlament i mars, är därmed i bruk.
Spanien är det fjärde europeiska landet att avkriminalisera dödshjälp efter Nederländerna, Belgien och Luxemburg.
Lagen öppnar för patienter med allvarliga obotliga sjukdomar eller svåra skador att be om hjälp med att avsluta sina liv i syfte att undvika "outhärdligt lidande". Patienten måste bedömas vara vid fullt medvetande för att kunna göra en sådan begäran. Den måste dessutom skickas in skriftligt vid två tillfällen med 15 dagars mellanrum.
Lagen har mötts av kritik från den katolska kyrkan och Spaniens politiska höger, där det konservativa partiet PP på torsdagen lämnade in ett överklagande vid landets författningsdomstol.