Det är oklart hur många av dem som berörs av kravet är ovaccinerade i dagsläget.
Vaccineringskravet aviserades av president Joe Biden för första gången i september, och efter det har federala myndigheter filat på detaljerna.
Under torsdagen kom regeringen med besked om att personal på företag med fler än 100 anställda som inte är fullvaccinerade den 4 januari, måste gå med på att testa sig för covid-19 minst en gång i veckan samt bära munskydd på arbetet. Kravet gäller även anställda inom vård och omsorg, samt alla underleverantörer till federala myndigheter.
Den som testas positivt för covid-19 måste flyttas från arbetsplatsen.
Kraven kommer att leda till att "miljoner amerikaner blir vaccinerade, att arbetare skyddas och liv räddas", enligt ett uttalande från regeringen som också poängterar att det kan få fart på USA:s ekonomi.
Vaccinkravet har lett till kritik från republikanskt håll men även från vissa arbetsgivare. I Texas har guvernören bannlyst krav på covidvaccinering på arbetsplatser, och delstater har också dragit Bidens vaccinkrav inför domstol.
Vissa arbetsgivare har uttryckt oro över att anställda som inte vill vaccinera sig kommer att säga upp sig, vilket ytterligare spär på problemen att hitta arbetskraft.