17-åringen var i mål på tiden 19,88 – fem hundradelar snabbare är det tidigare rekordet för 20-åringar och vann därmed semifinalen före Kenny Bednarek (19,90) och regerande världsmästaren Noah Lyles (19,91).
– Det här var första gången jag tävlade mot honom. Jag har sett massor av hans tävlingar och älskar det, säger Lyles efter loppet.
Knighton hamnade i rampljuset redan i maj när han klockade in på 20,11 och slog Bolts världsrekord för 18-åringar.
Tonåringen, som även var en stor talang i amerikansk fotboll hade en rad erbjudanden från olika college, men valde att satsa på löpningen i stället.
– Han påminner om mig om mig själv när jag kom ut hit 2016. Jag vill se folk som går sin egen väg, säger Lyles.
Natten mot måndag är det dags för final – och då kan 17-åringen säkra en plats i sitt första OS.
Det hade kunnat bli fler rekord under lördagens uttagningar i Eugene.
Regerande världsmästaren Grant Holloway vann finalen på 110 meter häck med tiden 12,96 efter att han i semifinalen sprungit i mål på 12,90 – en tiondel från världsrekordet 12,80 som landsmannen Aries Merrit satte 2012.
– Just nu känns världsrekordet möjligt. Många människor säger att jag inte kan springa på 12,9 igen, men jag bara fortsätter att hitta sätt att bli bättre, säger 23-åringen.