Williams, innehavare av 23 Grand Slam-titlar, avstår turneringen i Australien i slutet av januari på grund av skada.
– Det är aldrig ett lätt beslut att fatta, men min fysiska status är inte där den behöver vara för att att jag ska kunna spela, säger hon.
Spelaren, som tog den senaste av sina sju Australian Open-titlar 2017, har inte spelat sedan i juni då hon tvingades avbryta sin första match i Wimbledon-turneringen på grund av en skada i baksida lår.
Serena Williams har ryktats vara på väg tillbaka och så sent som förra månaden sade arrangören i Australien att amerikanskan var aktuell för att spel, men nu saknas Williams i den officiella startlistan.
Brittiskan Emma Raducanu, som sensationellt vann US Open i somras, gör sin debut i den australiska tävlingen. 19-åringen har tävlat en del under hösten, men utan att ta sig längre än till kvartsfinal, i en mindre turnering i Rumänien.
Med på listan finns dock världsettan Novak Djokovic, vars deltagande varit oklart på grund av att serben inte velat kommentera sin vaccinationsstatus – och att turneringen har ett krav på att spelarna ska vara fullvaccinerade för att få delta.
I tisdags fanns han dock med i Serbiens femmannalag till ATP Cup, som spelas i januari, och under onsdagen kom även beskedet kring Australian Open.
Roger Federer har sedan tidigare meddelat att han avstår på grund av skada.