Williams, som fick rubriker då hon förra veckan antydde att hon planerar att sluta efter årets US Open, hade inte mycket att sätta emot brittiska Emma Raducanu, 19:e på världsrankningen.
19-åringen vann med klara 6–4, 6–0 mot den 40-åriga tennislegendaren.
– Jag var nervös från den första poängen till den sista. Serena är farlig och kan komma tillbaka från alla situationer, säger Raducanu efter matchen.
Williams lämnade planen utan att prata med journalister och deltog inte vid någon presskonferens.
– Vi måste alla hedra Serena för hennes fantastiska karriär. Jag är så tacksam för att ha fått uppleva att möta henne och det faktum att våra karriärer har korsats, säger Raducanu.
US Open inleds den 29 augusti.